革兰氏染色：2.涂片后为何要固定,固定要注意\什么 3.说明是革兰氏染色.染色过程要注意什么.4.用油镜

革兰氏染色：2.涂片后为何要固定,固定要注意\什么 3.说明是革兰氏染色.染色过程要注意什么.4.用油镜
革兰氏染色：2.涂片后为何要固定,固定要注意\什么 3.说明是革兰氏染色.染色过程要注意什么.4.用油镜

革兰氏染色：2.涂片后为何要固定,固定要注意\什么 3.说明是革兰氏染色.染色过程要注意什么.4.用油镜
固定：手执玻片一端,让菌膜朝上,通过火焰2～3次固定,以不烫手为宜(温度高就烤变形了或者烤断了或者烤成碳了,后面要冲洗,不固定就冲走了啊,我的哥)
结晶紫初染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上,加适量的结晶紫染色液染色1min,以盖满细菌涂面为宜.之后倾去染色液,用水小心地冲洗.
碘液媒染：滴加卢哥氏碘液,媒染1min后用水洗去碘液
脱色：将玻片倾斜,连续滴加95%乙醇,脱色20～25s至流出液无色,立即水洗
（注意煤染和脱色的时间,不按要求就搞砸了）
复染：滴加蕃红复染2～5min,然后用水洗去涂片上的番红染色液.
晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干.
镜检：镜检时先用低倍,再用高倍,最后用油镜观察,并判断菌体的革兰氏染色反应性.
（G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经蕃红复染后就成红色.
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色,呈现蓝紫色.）
现在的随油镜便你怎么用都不容易坏,只要你不怕把载玻片弄破
要记得用二甲苯擦镜头上的香柏油,要不然下次什么都看不到
注意：
在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果,假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度,导致脱色不完全.假阴性可能是因为细胞固定过度,造成细胞壁通透性的改变,而出现假阴性结果；另外,细胞培养时间太长,可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶,也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果.
这都百度找的,你不动脑筋啊

过浓后，脱色时不易脱出。 革兰氏染色是微生物鉴定的重要手段之一..问题二：1.选用活跃生长期的菌种，否则造成假阴性； 2.涂片不宜过厚，以免

防止冲洗掉。手持玻片一端，使涂面朝上，通过微火2—3次。在火上固定时，用手触摸涂片反面，以不烫为宜，不可使载片在火上烤，以免细菌形态被毁坏。
时间的掌控，涂片的均匀，冲洗是防止污染，倾斜冲洗
先低倍镜，高倍镜，在油镜，涂油少量，二甲苯清洗玻片，油镜...

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防止冲洗掉。手持玻片一端，使涂面朝上，通过微火2—3次。在火上固定时，用手触摸涂片反面，以不烫为宜，不可使载片在火上烤，以免细菌形态被毁坏。
时间的掌控，涂片的均匀，冲洗是防止污染，倾斜冲洗
先低倍镜，高倍镜，在油镜，涂油少量，二甲苯清洗玻片，油镜

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