20微升pcr反应体系各种反应物分别应该加多少

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/06 00:22:06

20微升pcr反应体系各种反应物分别应该加多少
20微升pcr反应体系各种反应物分别应该加多少

20微升pcr反应体系各种反应物分别应该加多少
10×扩增缓冲液 2ul,4种dNTP混合物 各200umol/L 2ul,引物各10~100pmol 0.5ul,模板DNA 0.2ug,Taq DNA聚合酶0.2ul,Mg2+1.5mmol/L 1.5ul,加双或三蒸水至20ul.

10Xbuffer: 2ul;(含镁离子,如不含的话另外加MgCl2到终浓度10-20mM )
2.5mM dNTP: 0.6ul(我喜欢用的,公司一般都默认推荐用0.2uM,也就是1.6ul,个人感觉太多)
10uM Primer:0.4 ul(这是一对混合在一起的,也可以分开加)
10u/ul Taq :0.2 ul
Template:菌液1ul(我是跑菌落PC...

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10Xbuffer: 2ul;(含镁离子,如不含的话另外加MgCl2到终浓度10-20mM )
2.5mM dNTP: 0.6ul(我喜欢用的,公司一般都默认推荐用0.2uM,也就是1.6ul,个人感觉太多)
10uM Primer:0.4 ul(这是一对混合在一起的,也可以分开加)
10u/ul Taq :0.2 ul
Template:菌液1ul(我是跑菌落PCR,要按照你的模板浓度来加,一般质粒5-30ng就足够,genome 要100ng以上)
ddH2O: 15.8ul (补足20ul)
不过第一次做还是建议你按所买酶上的说明书来做,做不出来,还可以找他们,呵呵

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最好根据Taq酶的说明书做