作业帮根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/09 10:23:10
根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
你直接拿没有切的质粒去转化涂板 看有没有长 如果长了就是连接的问题 如果没长就是感受态的问题
你直接拿没有切的质粒去转化涂板 看有没有长 如果长了就是连接的问题 如果没长就是感受态的问题
这不是很正常么 长的菌太多了才不正常吧 做个菌P看看呗 然后再测序
以前做过农杆菌转化，氯化钙法是可行的。万一转不进去 改用电转化吧。效率高很多的。
你确定转化过程和感受态没问题吗？有没有做过平行的其他转化对照？如果别的质粒可以转进去，并且生长，则确实说明你的转化过程和感受态没问题。
如果是这种情况，那么问题有可能是在酶切后回收这一步。回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化。包括酶切回收buffer没有洗脱干净，或者留有酒精（对连接酶来说是比较致命的一点），或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题，都会影响到细菌接受...
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你确定转化过程和感受态没问题吗？有没有做过平行的其他转化对照？如果别的质粒可以转进去，并且生长，则确实说明你的转化过程和感受态没问题。
如果是这种情况，那么问题有可能是在酶切后回收这一步。回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化。包括酶切回收buffer没有洗脱干净，或者留有酒精（对连接酶来说是比较致命的一点），或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题，都会影响到细菌接受质粒的。建议你重新换一个酶切回收试剂盒。并且每一步都做好平行对照。查找出问题所在。
百替生物专业提供克隆构建服务。有需要也可以寻求公司的帮助。
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问题描述不清。“同时做对照：质粒酶切回收的产物电转”？也就是说拿线性的质粒去电转做对照？
如果是这样，你不如用感受态细胞直接做阴性对照，再用原质粒转化做阳性对照，这样更好分析结果。多克隆位点是很小一段，你认为切成2段，但实际可能只切了一刀甚至一刀都没切完
你还是把过程描述清楚些先...
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问题描述不清。“同时做对照：质粒酶切回收的产物电转”？也就是说拿线性的质粒去电转做对照？
如果是这样，你不如用感受态细胞直接做阴性对照，再用原质粒转化做阳性对照，这样更好分析结果。多克隆位点是很小一段，你认为切成2段，但实际可能只切了一刀甚至一刀都没切完
你还是把过程描述清楚些先
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