PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?PCR扩增时,电泳后发现的得到的片段远远小于目的片段.目的片段曾今扩增出来过?这是什么原因,怎么样处理 .
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/09/29 12:11:06
PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?PCR扩增时,电泳后发现的得到的片段远远小于目的片段.目的片段曾今扩增出来过?这是什么原因,怎么样处理 .
PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?
PCR扩增时,电泳后发现的得到的片段远远小于目的片段.目的片段曾今扩增出来过?这是什么原因,怎么样处理 .
PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?PCR扩增时,电泳后发现的得到的片段远远小于目的片段.目的片段曾今扩增出来过?这是什么原因,怎么样处理 .
你两次实验的PCR模板是否同一个样本?如果是同一个样本,那就说明你的PCR试剂或者引物有问题,更换
如果不是同一个样本,就再做一次实验
把曾经扩增出目的片段的那个DNA或cDNA样本,现在扩增片段小于目的片段的样本,两个样本一起再做一次PCR,比较一下结果就知道了.
如果两个都做不出来说明你的引物或者PCR试剂有问题
如果第一个做出来,第二个做不出来,那就是第二个不表达这个基因或者表达量很低.
1. primer problem. Unspecific amplification. Redesign.
2. Optimize PCR condition
3. Sequenced that little band see whether it's your problem or the database problem.
引物选错了?
前后所用的PCR试剂是不是都一样?如果一样那可能是引物的问题。
扩增得到的片段很小,那可能是引物二聚体,重新设计引物或者改善一下PCR反应体系中的一些离子浓度等,或改变一下退火温度。
试试热启动PCR或降落PCR来扩增目的片段