T 载体与 目的基因连接成功,测序结果也正确.从新摇菌,提取质粒,在进行双酶切,一直切不下来.用的是 ClaⅠ ,EcoR Ⅰ 两种酶 体系20酶切 3小时 过夜 都试过了 期待解决

T 载体与 目的基因连接成功,测序结果也正确.从新摇菌,提取质粒,在进行双酶切,一直切不下来.用的是 ClaⅠ ,EcoR Ⅰ 两种酶 体系20酶切 3小时 过夜 都试过了 期待解决 基因测序结果与应有序列比较是否一致,可以用什么软件来检测?用T载体连接上了目的基因进行测序,现在测序的结果出来了,要从中比对找到目的基因,看看测出来的序列和应有的序列是否一致, 目的基因与载体的体外连接.为什么目的基因要比载体多些? 目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 为什么粘性末端有利于基因载体与目的基因的连接? 将目的基因与载体连接起来基因操作应用哪种酶? 载体构建酶切位点的问题18—T克隆载体与目的基因连接后,送去测序,Blast之后得到序列,上面含有下一步的酶切位点,请问,目的基因序列包括酶切位点序列吗,师姐说不包括.酶切位点是PCR时加入 DNA连接酶把目的基因与载体的黏性末端的碱基对连接起来, 【求助/交流】目的基因与表达载体连接时有哪些要点? 【求助/交流】目的基因与表达载体连接时有哪些要点? 是否目的基因在PCR扩增时不用在引物中加入酶切位点,就可与pGEM-T载体连接?为什么? 双酶切鉴定（或者测序）是否含有目的基因的时候,为何用pMD18-T载体?过程主要是：从小麦胚胚芽鞘中提出总的RNA,反转录cDNA,然后纯化cDNA,特异性PCR扩增,电泳,得到目的基因,然后连接载体pMD18-T 青霉素抗性基因,切割后在DNA连接酶的作用下与载体连接产生3种连接产物,目的基因-目的基因连接物;目的基因-载体连接物;载体-载体连接物.将这些产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转 T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和已经预先双酶切的目的载体连接,那么?先前的目的基因为什么不直接和目的载体相连呢?为什 载体和目的片段连接目的片断与载体的摩尔比大于3-10：1.摩尔数怎么确定?除了用分光光度计测OD,同门说跑胶能估算,请问怎么估算?这个比例对结果影响很大吗? 目的基因经特定载体进行拼接重组DNA可能有：目的基因-目的基因 目的基因-载体 载体-载体目的基因与经页顶酶切后的载体进行拼接重组DNA可能有：目的基因-目的基因 目的基因-载体 载体-载 目的基因与质粒反向连接为什么就不能正确表达我的意思是构建基因表达载体是为了让目的基因控制的基因序列表达,而不是让质粒与目的基因共同构成的基因序列表达,目的基因的基因序列