TA克隆的具体原理是什么?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/06 07:46:14

TA克隆的具体原理是什么?
TA克隆的具体原理是什么?

TA克隆的具体原理是什么?
TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片断与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法.因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3加上A.例如：Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3端自动添加一个3-A突出端.只有用经过特殊处理的具有3-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接.　通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过序列测定清楚DNA序列.由于在PCR过程中,使用的DNA聚合酶不同,往往分为2种情况：（1）使用不同的Taq酶,在PCR扩增循环结束后,加上72℃ 10分钟一个过程,Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A,因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接.（2）使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在扩增产物的3末端加上A,得到的DNA序列为钝端,因此,需要在回收纯化后进行加A的过程,通常是以PCR回收产物为模板,加上一定量的普通Taq酶和反应液,加入dATP（或dNTP）,72℃ 10分钟,然后将加A产物直接用于TA连接.

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