请描述用载体pUC18来克隆DNA片段的过程.在这个克隆实验中,你怎样选择含有克隆片
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/05 02:26:41
请描述用载体pUC18来克隆DNA片段的过程.在这个克隆实验中,你怎样选择含有克隆片
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pUC18中的reporter gene是LacZ,而它的MCS(multiple cloning sites)是在LacZ基因中的.当没有外源DNA片段的pUC18载体直接转化进入E.coli细菌时(不含有Amp抗体基因和LacZ基因的细胞系),在适当加入IPTG和x-gal的LB/amp培养基上,菌落生长呈蓝色.而没有转入pUC18的菌落由于无法存活在Amp培养基上而死亡.当你的外源DNA片段克隆进入pUC18载体后,LacZ基因被破坏,当此载体转入细菌细胞后,其依然可以生长在LB/Amp培养基上(载体上的Amp抗性基因依然可以被转录发挥作用),但是在加入IPTG诱导的x-gal培养基上,由于其LacZ基因被破坏,所以菌落颜色成白色.
因此,将外源基因克隆进pUC18后,并将其转化入不含有Amp抗体基因和LacZ基因的E.coli菌株中,将其生长在LB/Amp(IPTG+,x-gal+)的培养基上,选择白色的菌落即含有你的目标克隆片.
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