作业帮某一靶基因通过PCR未能扩增出特异性条带?请分析其原因 这是一道论述题
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/06 00:37:55
某一靶基因通过PCR未能扩增出特异性条带?请分析其原因 这是一道论述题
某一靶基因通过PCR未能扩增出特异性条带?
请分析其原因 这是一道论述题
某一靶基因通过PCR未能扩增出特异性条带?请分析其原因 这是一道论述题
楼上已经给出了解答方向,我来说说,大家可以在补充：
PCR未得到特异性条带,可能因为如下因素
一,模板因素
1,使用了部分降解的模板,对策是使用新鲜提取的模板；
2,使用了错误的模板,很多真核基因是带有1个或多个内含子,而且内含子往往较长,此时用基因组DNA做模板是不合适的,需用含有其完整长度的cDNA为模板；
3,模板量过少或过多,一般来讲,模板只要不是少到极限是能够扩增的,但模板过多则会形成涂抹带,也无法获得特异性片段,对策是调整模板量；
二,引物因素
1,引物设计或合成过程有误,重新检查引物序列及方向性是否正确；
2,引物长度.引物过长,虽会增加pcr特异性,但会降低pcr效率；引物过短,则特异性不足,所以要根据模板的复杂程度设计合适长度的引物,保证pcr的特异性和效率；
3,引物的gc含量及结构,gc含量过高会对pcr产生不利影响,如果引物自身会形成发夹等2级结构或正反引物序列互补,也会降低pcr效率,对策是调整扩增起始或终止位置,以调整引物序列；
三,PCR条件
1,合适的DNA聚合酶,包括酶的活性、效率及适用对象,如果为长片段pcr,需用相应的酶以取得更好的pcr结果；
2,是否设置了合适的延伸时间和温度,如,酶的效率是1kb/min,目的片段为2kb,那么延伸时间需2-2.5min,如果只设了1min,则无法成功pcr；又如,有些酶的延伸温度是68℃,有些是72℃,如果温度设置有误,自然失败；
3,退火温度或时间,退火温度过高会导致pcr效率降低,退火温度过低会导致特异性降低,都会导致实验失败；摸索合适的退火温度,同时设置足够的退火时间；
4,pcr的循环数是否足够,一般设在25个以上的循环数；
5,其他pcr因素,如是否添加了合适的Mg离子浓度和dNTP浓度,是否设置了合适的预变性和变性温度等等.
纯属手打,欢迎采纳,祝愉快!
模板有污染
引物特异性不好
退火温度不合适
就把所有PCR的相关因素都说一下呗