DH5a的基因型怎么分析F -φ80 lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169 end A1 recA1 hsdR17(rk -,mk -) sup E44 λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA谁知道这个基因型怎么分析,有没有甲基化的位点?回答得满意会加财富值.

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/05 22:05:04

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DH5a的基因型怎么分析
F -φ80 lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169 end A1 recA1 hsdR17(rk -,mk -) sup E44 λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA
谁知道这个基因型怎么分析,有没有甲基化的位点?
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DH5a的基因型怎么分析F -φ80 lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169 end A1 recA1 hsdR17(rk -,mk -) sup E44 λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA谁知道这个基因型怎么分析,有没有甲基化的位点?回答得满意会加财富值.
不含甲基化的位点,否则不能够作为感受态.
F-,F 因子缺失
φ80dlacZΔM15,lacZDM15(Lactose)Map position:8 min功能:lacZM15是表达β-半乳糖苷酶α片断的一段基因,当M15缺失(△M15)时,lacZ基因虽然能表达ω片断,但不能表达α片断,β-半乳糖苷酶没有活性.当带有lacZ(α片断)基因的lac操纵子通过载体DNA(如pUC19 DNA)转化到lacZ△M15基因型的细胞 (如E.coli JM109)时,在有IPTG (异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情况下, β-半乳糖苷酶表现出活性,它能分解X-gal (半乳糖类似物),使其呈现蓝色.因此可以通过平板上的蓝白菌落进行克隆体的鉴定.
Δ(lacZYA-argF)U169,
deoR,功能:deoR 是大肠杆菌中deo 操纵子的调节基因,它表达的阻遏蛋白对deo 操纵子具有重
要的调控作用.deo 操纵子位于大肠杆菌基因图谱100 min 的位置,它含有deoA、deoB、
deoC 和deoD 等结构基因,分别表达DNA 代谢所需的酶类,即胸腺嘧啶磷酸化酶、磷酸
转位酶、脱氧核糖磷酸醛缩酶和嘌呤核苷磷酸化酶.deoR 基因的变异,使deo 操纵子的阻
遏蛋白不能表达,宿主细胞合成大量的dCTP,可以选择性地改善大分子DNA 的转化.
recA1,recA (Recombination) 减少克隆DNA的非特异性重组.
功能:recA 基因表达ATP 依赖型DNA 重组酶,它在λ-噬菌体与基因组DNA 的溶原重组
时起作用,同时具有对DNA 放射性损伤的修复功能.由recA 基因的变异所产生的基因型
使同源或异源DNA 的重组不能进行,保持插入DNA 的稳定性,对DNA 的转化有利.一个
菌株的基因型如果是recA,则说明此菌株的表现型是重组缺陷的.
endA1,endA (Endonuclease) 无Endonuclease I 酶活性,有利于质粒的纯化.
功能:endA 基因表达非特异性核酸内切酶I,它能使所有DNA 双链解开,在DNA 的复制
和重组中起重要作用.endA 基因的变异将使插入的外源DNA 更加稳定,提取的质粒纯度
更高.
hsdR17(rk-,mk+),
限制缺陷,修饰正常 可使 DNA 甲基化,但不限制外源 DNA .
hsdR (Host specificity defective)
功能:hsdR 基因表达I 型限制酶EcoK (K12 株) 或EcoB (B 株),在大肠杆菌细胞中起到
一种“抗体”的作用,对外来的各种 DNA 有严格的限制.HsdR 基因的变异导致菌株细胞
内的I 型限制酶EcoK 或EcoB 活性缺失,这对于外来基因的导入及质粒转化是有利的.
hsdS20 (rB-、mB-),其中S20 代表特异性识别蛋白发生变异,()中的 rB-、mB-表示由于S20 的变异而导致B 株来源的hsdR 和hsdM 的功能缺失.
phoA,
supE44,supE (Suppressor)
功能:supE 基因表达的阻遏蛋白与停止密码子UAG 结合,使蛋白质合成停止.supE 基因
发生变异时,不能表达正常的阻遏蛋白,即使遇到停止密码子UAG,蛋白质合成仍能继续,
并使UAG 作为一个密码子来编码谷氨酰胺(Glutamine),从而使发生了琥珀突变(AAG
→UAG)的基因对蛋白质表达得以延续,因此称supE 为琥珀突变抑制因子.
supE44(sup 基因座E 的44 位突变).如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变,则用连字符“-”代替大写字母,如trp-31.
λ-,
thi-1,功能:thi 基因包含有thiA、thiB、thiC、thiD、thiK、thiL 等.thiA 表达硫氨素噻唑转运蛋白、thiB 表达硫氨素磷酸盐焦磷酸化酶、thiC 表达硫氨素嘧啶转运蛋白、thiD 表达磷酸甲基化嘧啶激酶、thiK 表达硫氨素激酶、thiL 表达硫氨素甲磷酸激酶.thi 的变异使硫氨素的生物合成不能进行,最小培养基中必须添加硫氨素(VB1),细胞才能正常生长.
硫胺素代谢突变 在基本培养基上的生长需硫胺素的存在.
gyrA96,gyrA(Gyrase)
功能:gyrA 基因表达DNA 促旋酶A 亚基.DNA 促旋酶在DNA 复制时具有使DNA 解旋和回旋的作用.萘啶酮酸 (Nalidixic acid)、4-喹啉(4-Quinoline)等抗生素抑制DNA 促旋酶的活性是通过与促旋酶复合体 (A2B2)中的A 亚基的结合实现的.gyrA 基因的变异使DNA促旋酶A 亚基不能正常表达,萘啶酮酸和荧光喹啉等失去结合目标,从而使该基因型的菌株具有了对萘啶酮酸(Nalr) 和荧光喹啉的抗性.
relA1relA(Relaxed)
功能:relA 是松弛调节基因,对RNA 的合成具有调节抑制作用.同时relA 基因还表达ATP:
GTP3'-焦磷酸转移酶,负责在氨基酸饥饿状态下鸟苷3',5'-二磷酸 (ppGpp) 的合成,以适
应饥饿环境. relA 基因的变异对目的基因的转录有利.