石蜡切片的制作方法?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/06 03:50:44
石蜡切片的制作方法?
石蜡切片的制作方法?
石蜡切片的制作方法?
肠道的石蜡切片的制作
(1)\x05取材:用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠(据胃5cm左右位置的前肠),组织块的规格为 5mm×3~5mm×10~15mm.
(2)\x05固定:采用Bouin氏固定液装瓶固定,固定液用量一般为组织块体积的10~20倍.
(3)\x05冲洗:固定12~24h后,将材料自固定液中取出后,在70%酒精中换洗几次,可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止.
(4)\x05脱水:70%酒精(1h)→80%酒精(1h)→90%酒精(1h)→95%酒精(1h)→无水乙醇Ⅰ(1h)→无水乙醇Ⅱ(1h)
(5)\x05透明:无水乙醇与二甲苯溶液(1:1)(1h)→二甲苯Ⅰ(1h)→二甲苯Ⅱ
(1h)
(6)\x05浸蜡:浸蜡的全过程应在恒温设备中进行,将恒温箱调至58℃.
二甲苯与石蜡混合液(1:1)(1h)→石蜡Ⅰ(1h)→石蜡Ⅱ(1h)
浸蜡必须彻底,否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片
的质量.
(7)\x05包埋:在小纸盒内注入溶化的石蜡,将已浸蜡的组织块置入其内,使蜡块迅速冷却硬固,组织块在蜡块中可长期保存.
(8)\x05切片:包埋后的组织块经修整后,用切片机切成5~7μm的石蜡带.
(9)\x05粘片:将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片,然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片,组织带即可粘在载玻片上.
(10)\x05烤片:将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干,待2~3小时后,即可取下编号.
(11)\x05苏木精—伊红染色:将烤干的片进行染色.
①脱蜡:将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain.
②复水:将脱蜡后的切片移入100%酒精5min→95%酒精5min→85%酒精5min→70%酒精5min→蒸馏水5min
③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞:将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中,10min,使细胞核着色;用自来水洗去切片上残余染液;用1%的盐酸酒精分色3秒;用自来水浸洗3h,显微镜下观察,直到胞核蓝化为止;然后切片入曙红溶液中染色5min,使细胞质着色.经95%酒精与100%酒精脱水,二甲苯透明后,中性树胶封片.
④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞:切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15~20min→蒸馏水速洗,镜检→95%和100%酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片.
⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞:切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1%高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色(37℃恒温箱)30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95%酒精和100%酒精脱水→二甲苯透明,中性树胶封片.
切片经脱蜡下行入水:二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一无水乙醇(5 min)一无水乙醇(5 min)一
95% 乙醇(5 min)一85%乙醇(5 min)一70% 乙醇(5 min)一流水冲洗(20 min).人Ehrlich苏木精染
色12 min,蒸馏水速洗.盐酸酒精分色,镜检控制时间.入伊红染色2 min,蒸馏水略洗.盐酸酒精分色,镜检控制时间.经95%酒精与无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片.
阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法
阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法