用乳腺细胞培养上皮细胞时需注意什么
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/09 04:45:39
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博凌科为生物科技-为你用乳腺细胞培养上皮细胞时的注意事项:①尽可能去除脂肪组织,用无钙,镁离子的PBS清洗(200U/ml青霉素,200ug/ml链霉素)3~5次,将组织剪成碎块,移入离心管,用吹管吸打分散,静置3~5min,使乳腺细胞及细胞团块沉积管底,脂肪,纤维等碎块悬浮上层,吸除上 层液,补加洗液重复3~5次,最后用培养基重悬细胞,用3~4层无菌纱布过滤,调整细胞密度后分瓶培养.②如果标本中纤维组织较多,可用胶原酶消化法获取细胞.③开始有巨噬细胞存在,可作滋养细胞,随着上皮细胞的生长和克隆形成,巨噬细胞逐渐消失.④培养时可用经照射或用丝裂霉素C处理过的3T3细胞作饲养层细胞.也可用胶原层,既利于上皮细胞生长,又利于从底层分离.⑤培养基中也可加刺激生长因子如EGF,胰岛素,氢化可的松,猪促乳素和前列腺素E1等,有利于细 胞生长繁殖.
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