我要用western检测一种细胞系中分泌蛋白的表达,eg:细胞因子,是检测培养液中的蛋白还是细胞抽提物种的呢我个人觉得分泌蛋白是通过分泌到细胞外之后产生作用的,那就应该检测培养液中的蛋
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/09 09:49:53
我要用western检测一种细胞系中分泌蛋白的表达,eg:细胞因子,是检测培养液中的蛋白还是细胞抽提物种的呢我个人觉得分泌蛋白是通过分泌到细胞外之后产生作用的,那就应该检测培养液中的蛋
我要用western检测一种细胞系中分泌蛋白的表达,eg:细胞因子,是检测培养液中的蛋白还是细胞抽提物种的呢
我个人觉得分泌蛋白是通过分泌到细胞外之后产生作用的,那就应该检测培养液中的蛋白了,但是又是从细胞中分泌出来的,检测细胞抽提物中的应该也说得通,那究竟应该以那个为准呢?或者两个都检测,研究某种物质对此蛋白的表达量的影响时,两个地方的蛋白含量变化检测结果会是一致的吗?
或者不用western,其它的方法?免疫组化?
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你不妨对细胞内外的蛋白都做一个检测,但是检测细胞外的蛋白比较麻烦.因为培养基的成分本身很复杂.等细胞长满后用完全培养基培养24小时,然后用PBS洗两遍,加Hepes溶液,使细胞覆盖就行.培养2-3天收集培养液离心,浓缩上清至原体积的1/30-1/10,然后做western检测.如果还检测不出来就用上述液做个免疫沉淀,然后做western.但这样就误差太大,基本看不出来变化.所以建议:(1)以细胞内的蛋白做,刺激时间不要过长.(2)用表达量与此蛋白有直线相关的其他蛋白来代替,比如其信号通路上下游的一些激酶之类的.
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