DNA的限制性内切酶酶切和鉴定的原理

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/06 10:03:24

DNA的限制性内切酶酶切和鉴定的原理
DNA的限制性内切酶酶切和鉴定的原理

DNA的限制性内切酶酶切和鉴定的原理
原理:限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA.它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在.Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离.Ⅱ类由两种酶组成:一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列.Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础.绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'),有少数酶识别更长的序列或简并序列.Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性未端,如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端.
5'…G↓AATTC…3' →5'… G AATTC…3'
3'…CTTAA↑G …5' →3'… CTTAA G…5'
鉴定:利用电泳来鉴定 利用切过了的DNA片段大小不一所跑出的条带远近不同来鉴定是否剪切成功

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