本人新手,连接产物转化时,流程上都是说200微升感受态细胞10微升连接产物,能不能用5微升连接产物与100微升感受态细胞混合,效果怎么样,同学说不用蓝白斑筛选,长出来的单菌落大都是连接成
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/08 17:43:28
本人新手,连接产物转化时,流程上都是说200微升感受态细胞10微升连接产物,能不能用5微升连接产物与100微升感受态细胞混合,效果怎么样,同学说不用蓝白斑筛选,长出来的单菌落大都是连接成
本人新手,连接产物转化时,流程上都是说200微升感受态细胞10微升连接产物,能不能用5微升连接产物与100微升感受态细胞混合,效果怎么样,同学说不用蓝白斑筛选,长出来的单菌落大都是连接成功的,
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一般基因连接T载体的话可以用5 ul的连接产物加到100 ul甚至50 ul的感受态细胞中,如果是基因连接其他表达载体最好用10 ul吧.效率主要看连接的效率和感受态细胞的效率.实际操作中,会将长出来的菌落挑5个进行菌落PCR,已经鉴定阳性菌落.
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转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带(即之前的连接产物,约3k
PCR产物测序前做大肠杆菌连接转化的目的是什么?
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