PCR反应的循环前和循环后的温度和时间做pcr除了必要的变性,退火,延伸的温度和时间,还需要在循环之前设定一个温度和时间,循环完成之后也要设定个温度和时间,最后还有个保存的时间,我想
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/07 23:30:04
PCR反应的循环前和循环后的温度和时间做pcr除了必要的变性,退火,延伸的温度和时间,还需要在循环之前设定一个温度和时间,循环完成之后也要设定个温度和时间,最后还有个保存的时间,我想
PCR反应的循环前和循环后的温度和时间
做pcr除了必要的变性,退火,延伸的温度和时间,还需要在循环之前设定一个温度和时间,循环完成之后也要设定个温度和时间,最后还有个保存的时间,我想问一下,循环开始和循环完成的的温度和时间的数值和最后保存的温度
PCR反应的循环前和循环后的温度和时间做pcr除了必要的变性,退火,延伸的温度和时间,还需要在循环之前设定一个温度和时间,循环完成之后也要设定个温度和时间,最后还有个保存的时间,我想
第一步变性95度3分钟 然后开始循环 完了72度10分钟 然后hold在16度就可以了
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应------------------这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。-----------------------------看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的说下我们来看看最后一个循...
全部展开
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应------------------这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。-----------------------------看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的说下我们来看看最后一个循环先95度,dna在高温下变性,解链成单链分子然后退火,具体温度与所用引物有关,就以55度为例吧。引物与单链dna模板结合上去再72度延伸,在taq聚合酶的作用下,引物延伸。该循环结束。注意,此时尚有正处于合成过程中的dna链,为了保证充分的得率,所以再增加5分钟,以允许尚处于合成状态的dna分子能够完成整条链的合成。在rna的逆转录时,也有这样的一个步骤用途也是一样的。不知这下有没有讲清楚?
收起