pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任何条带,扩的gapdh应该在200bp左右,RNA纯度分析每次结果

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/07 22:49:35

pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任何条带,扩的gapdh应该在200bp左右,RNA纯度分析每次结果
pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带
不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任何条带,扩的gapdh应该在200bp左右,RNA纯度分析每次结果都很好的,260/280都在2.0附近.pcr体系是50ul:10xbuffer 5ul Mgcl2 5ul 2.5的dNTPs 4ul 10umol/l的引物个1ul cDNA 2ul .94度 30秒 58度30秒 72度40秒 共40个循环.昨天换了新鲜组织刚扩了一个目的基因一个gapdh,两个都是只有一条100bp下的条带,且目的基因的这个条带比较粗亮.我该从哪里找问题?还有用的各种试剂-20度如果过了半年了,是不是已经过期?

pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任何条带,扩的gapdh应该在200bp左右,RNA纯度分析每次结果
首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.
首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在gapdh多不出来,要么你就换一个基因试一试,比如actin,或者你直接用随机引物试一试,看看反转录后的产物是否有模糊成片的电泳条带.
如果没有问题,那就看看是不是引物问题,要么是引物没有设计好,要么就是引物稀释时间有些长了,重新稀释.
再然后就可能是PCR条件的问题,比如我做20ul体系的时候,Mg2+用的是1.2-1.4ul,Mg2+浓度越大,扩增的非保守性越多.再看,退火温度合不合适,是否有些高,做一个温度梯度试验可以解决这一问题.
也不知道你做的是什么生物,PCR程序还可以适当的调整,如果扩增不出来,可以试一试tuckdown的方法
在PCR反应体系使用普通的rTaq(Takara),如果不行,可以将buffer换成G buffer试一试,不要一上来就用特别保守的酶.
另外,100bp一下的那个条带,基本上可以认为是引物二聚体,说明你的引物合成的有问题呀!

pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任何条带,扩的gapdh应该在200bp左右,RNA纯度分析每次结果 反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,这是为什么呢?Oligo(dT)反转录,目的片段2700bp,引物二聚体小于100bp RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul (浓度100ng)引物上下游各1u RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul (浓度100ng)引物上下游各1u PCR实验BP是什么意思? RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体 RT-PCR结果中的bp是什么单位?western-blot中的Da呢? 为什么DNA测序的结果比目标片段长 《急 我的酵母菌PCR观察结果大小只有600bp左右,可是为什么送去“上海生工”测序完后得到的结果有752bp?而其我用chromas软件观察看到552后的曲线都很乱. PCR产物小于100bp是什么原因?为什么我希望得到300bp的PCR产物,却得到小于100bp的片段呢? PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教, PCR产物问题如图~第一张是taq酶跑出来的条带~有产物,大小780bp~marker是DL2000而第二次是高保真酶跑出来的电泳图,没有我的目的产物,只有很多二聚体这是为什么呢?我用的引物都是一样的~2次PCR 用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计 pcr 条件我做了IGF-1基因5'调制区的,按照别人发的文章条件跑的PCR,自己又优化了条件,结果PCR产物经检测,有目的条带,但好像在100bp下面有一条条带,我怀疑是引物二聚体.请问各位有什么办法能 提取IBDV基因组RNA,然后RT-PCR,结果跑出条带700bp左右,原因是什么啊!目的条带应该是3000bp左右. pcr条件设定:我要p一个2000+bp的片段 pcr条件怎样设我的两个引物都是33bp GC含量为43% p过两次 都是引物二聚体 为什么PCR产物总在2000bp以上我设计的产物是1000BP左右 但是是简并引物 为什么每次跑出来的产物是2000BP以上呢? 基因克隆和序列分析相关问题我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%! 荧光定量PCR引物设计为什么要在100-200bp之间