上下游引物GC%差距很大,怎么处理,40%和80%,怎么处理?有什么特殊的酶和buffer吗?

上下游引物GC%差距很大,怎么处理,40%和80%,怎么处理?有什么特殊的酶和buffer吗? 要扩增3000左右的目的片段,但是设计的上下游引物的GC含量差异很大,如何是好?急求……即起始密码子之后和终止密码子之前的部分,GC差异很大…… PCR 引物设计,在扩增一个基因片段,1200bp左右,编码区1000个bp左右.由于上游引物GC含量高,我想分两段扩增.设计一个引物,下游设计一个引物,上下游引物间想穿插（包含一定共同片段）,这样成吗. 知道基因序列号,引物上下游,怎么知道P出来是多少bp? 上下游引物混合在一起了如何分开?给我的上下游引物混合在一起了,可是要测序就得分开,怎么分开上下游引物混合在一起了如何分开?给我的上下游引物混合在一起了,可是要测序就得分开,怎 知道引物序列怎么推算扩增片段查到用blast,但是具体提交了自己的上下游引物后怎么让它出结果呢 已知下游引物序列,怎么去基因DNA上找到这个序列?如给定3-GTGTATGTGGCAATGCGTTC找的方法是不是和上游引物不一样? pcr时如何进行上下游的引物设计? 【求助】测序结果找不到上下游引物,怎么回事啊? 什么是上游引物和下游引物?麻烦再问一下：上下游引物是不是多用在多对引物的扩增中？？？谢谢 追问引物设计第一次PCR的产物胶回收后用纯化吗,还是可以直接当做底物?目的基因3‘端GC含量太高,导致上下游引物Tm值差别太大,这样可以用吗?是不是内引物条件可以适当放宽?还有,我用的是p 排水管道下游坡度变小怎么处理 什么是上游引物和下游引物? 询问PCR退火温度设计引物单上数据如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC（GC含量50%）Tm（1M Na+）：68.2Tm（50mM Na+）：46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA（GC含量45%）Tm（1M Na+）：66.2Tm（50mM Na+）：44.6顺便问下大家,Tm（1 做梯度PCR时,设置梯度值一般怎么结合上下游引物设?怎么让跑出的条带更特异?我一般能详细点回答更好了.我一般都是以上下游引物中最低的那个开始设,2度一个梯度,这次设计的引物特异性不 primer3引物设计结果怎么只有下游引物是原基因的互补序列,上游引物是原序列?直接在线设计的LEFT PRIMER tacacaaagacgctgccaagRIGHT PRIMER tggcttgttgttacccatga上游引物处原序列 tacacaaagacgctgccaag下游tcatgggtaac 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 为什么河流上游水小,下游却很大